Центр по применению BioLink в г.Сучжоу - опыт отработки процесса клиента

 

Возможности платформы: комплексная поддержка на всех этапах

Центр по применению BioLink занимает площадь около 3000 квадратных метров и включает в себя лаборатории исследований и разработок, прикладных исследований, культивирования клеток и очистки, оснащённые современным оборудованием и разнообразными реакторными системами.

Рис. 1. Лаборатория Центра прикладных исследований в Сучжоу

Команда обладает всеми необходимыми навыками для разработки и обучения процессам, начиная с создания антигенов, культивирования клеток, экспрессии белков и заканчивая хроматографической очисткой. Центр участвовал в различных проектах, связанных с антителами, вакцинами, препаратами крови, рекомбинантными белками и натуральными экстрактами. Будь то разработка процессов, передача технологий, валидация или оптимизация, центр может предоставить комплексные решения, учитывающие глубину исследований и разработок, а также потребности в индустриализации.


Рис. 2. Услуги, доступные в Центре Сучжоу

Аппаратные возможности центра

1. Upstream процессы

• Платформа для ферментации в лабораторных условиях (стеклянный сосуд объемом 3 л/7 л): разработка процессов в лабораторных условиях объемом 1–5 л и подготовка образцов.
• Платформа для ферментации в волновых реакторах: подготовка образцов объемом 5–25 л, подготовка посевного материала (200 л).
• Платформа CHO, HEK293: быстрая подготовка образцов в миллиграммовых объемах.
• Ферментация в объемах 50 л/200 л.

2. Downstream процессы

• Разработка процесса очистки: антитела (моноклональные антитела/биспецифические антитела/триспецифические антитела), вакцины (вакцины на основе вирусоподобных частиц, субъединицы и т. д.), препараты крови, рекомбинантные белки (коллаген/другие) и т. д.
• Подготовка образцов объемом 50 л/200 л.
• Проверка срока службы хроматографических сорбентов:

        1. Разработка программы, внедрение и предоставление результатов
        2. Оборудование и документация соответствуют требованиям к ПК
        3. Опыт контроля эндотоксинов

Проект по оптимизации процесса клиента

В ходе реализации предыдущих проектов Suzhou Application Center помогал клиентам устранять узкие места в исследованиях и разработках и ускорять реализацию проектов благодаря мощным техническим возможностям и гибким решениям.

Пример 1: масштабирование процесса производства вакцины против опоясывающего герпеса

Требования заказчика: перенести процесс культивирования в биореакторе из нержавеющей стали в одноразовый биореактор объемом 200 л и оптимизировать процесс очистки (чистота > 99 %, коэффициент извлечения > 25 %).

Результаты работы: успешно воспроизведен и оптимизирован процесс культивирования в резервуаре объемом 7 л с плотностью клеток 11 × 10⁶/мл и экспрессией белка около 1,5 г/л. Оптимизированная чистота трехступенчатого процесса хроматографии составляет > 99 %, что соответствует потребностям клиентов и обеспечивает масштабируемость до объема 200 л.

Основные данные, полученные в ходе разработки:
Оптимизированный технологический процесс:

Технологический процесс культивирования клеток

Схема процесса очистки


Процесс культивирования


Кривая метаболизма




Трехэтапный процесс хроматографической очитки

Рис. 3: MaXtar® Q анионообменная хроматография

Рис. 4. Гидрофобная хроматография с использованием Phenyl Chromstar® HP

Рис. 5. Катионный слой SP Chromstar® FF

Случай 2: разработка процесса очистки человеческого рекомбинантного альбумина

Требования заказчика: разработать и протестировать процесс в пилотном масштабе с чистотой ≥ 98 % и коэффициентом извлечения 45–50 %.
Результаты работы Центра применения в Сучжоу: завершена разработка процесса и проведено три цикла воспроизведения процесса, выход продукции в трех партиях составляет ≥ 45 %, а чистота — ≥ 98 %. Кроме того, мы помогли заказчикам воспроизвести процесс на месте, а также повысить стабильность и воспроизводимость процесса и создали для них более стабильную технологическую систему.

Ключевые данные, полученные в ходе разработки:

Валидация процесса, партия 1 в качестве примера: 

Трёхэтапный процесс хроматографии

MaXtar® Q

Мультимодальная хроматография

 MaXtar® MMC

SDS-PAGE обнаружение

Случай 3: валидация срока жизни сорбента

Требования заказчика: провести валидацию 200-цикловой модели с уменьшенным масштабом и всесторонне оценить ключевые показатели эффективности процесса, такие как связывающая способность, чистота, контроль примесей и выход продукта во время тестирования.

Результаты применения в Сюйчжоу: после 200 циклов DBC 10 % остается выше 80 %, степень извлечения остается выше 85 %, а чистота продукта и степень удаления HCP стабильны. Это поможет заказчикам снизить долгосрочные производственные затраты и проверить экономическую эффективность процесса.

Анализ ключевых индикаторов 

Случай 4: подготовка коллагена для тестирования сорбентов

Требования заказчика: подготовить коллаген для тестирования сорбента, чистота > 95 %.

Результаты центра применения в Сюйчжоу: в результате ферментации 7 л E. coli был получен коллаген чистотой > 95 % с помощью двухступенчатой хроматографии, выход составил около 8 г. 

 Основные данные, полученные в ходе разработки:
Ферментация e.coli

Ключевые параметры настольного стеклянного биореактора объемом 7л
Объем	Исходный объём 3,6 л, объём инокулята 0,4 л (исходный показатель OD600 1,5)
Температура	Начальная температура 37 °C, температура индукции 25 °C
Перемешивание	Начальная скорость вращения 300 об/мин, максимальная скорость вращения 800 об/мин. (Если скорость вращения ниже установленного значения, увеличивайте ее на 100 об/мин каждый раз)
pH	7,0 ± 0,2; каскадный насос pH (25–35 % аммиачной воды)
Аэрация	Воздух 1 л (кислород подается на более позднем этапе)
DO	40 % (каскадная MFC с O₂)
Индукция	Начальная точка индукции OD600 > 40, температура 25 °C, концентрация IPTG 1 мМ
Подпитка	Когда уровень DO быстро повышается, начинайте подавать подпитку постепенно (120 мл каждые 2 часа)
Конечная точка для сбора	OD600 снижается или синтез продукта останавливается

Процесс очистки


Катионообменная хроматография
 
SDS-PAGE Detection:

Случай 4: транзитная экспрессия белка

Требования заказчика: повысить уровень экспрессии слитого белка Fc и подготовить образцы массой 5–10 мг с чистотой ≥ 95 %.
Результаты центра применения в Сюйчжоу: при использовании системы временной экспрессии HEK293F в сочетании с хроматографическим сорбентом BioLink Protein A чистота конечного продукта составляет ≥ 95 %, а концентрация достигает 1 мг/мл. Помогаем заказчикам быстро получать высококачественные образцы на ранних этапах исследований и разработок.
Подготовка плазмид

Преимущества: с помощью хроматографии можно получить большое количество плазмид, а их чистота выше.

Временная экспрессия и очистка

Постоянные инновации и взаимная выгода

Благодаря ряду успешных проектов по разработке и оптимизации процессов Центр прикладных исследований BioLink в г. Сучжоу не только продемонстрировал свои сильные технические возможности, но и подтвердил свою ценность как акселератора исследований и разработок для клиентов в области биотехнологий. В будущем центр будет и дальше опираться на комплексные платформы для прикладных исследований и разработок, чтобы продвигать технологические инновации и помогать большему числу клиентов в эффективной трансформации и индустриализации проектов.