Большинство из тех, кто сталкивался с культивированием клеток, могут вспомнить весь процесс замораживания и реанимации клеток, закрыв глаза.
Источник:ExCell & Ecosafene
"Надев защиту для рук и лица, мы открыли резервуар с жидким азотом, и белый туман, образовавшийся в результате испарения жидкого азота, медленно потек вниз из отверстия резервуара. Заглянув в резервуар, мы, кажется, почувствовали, как поверхность жидкого азота соприкасается с воздухом, кипящим под воздействием огромной разницы температур. Бесчисленные клетки, словно семена жизни, спят внутри криогенной жидкости, недоступной глазу. Мы как можно быстрее достаем уже промаркированные пробирки для криоконсервации клеток. После быстрого оттаивания на водяной бане и ряда операций клетки завершают переход из спящего состояния в активное, после чего нам остается только молиться, чтобы пробудившиеся клетки как можно скорее вернулись к своей нормальной жизнедеятельности".
Большинство из тех, кто сталкивался с культивированием клеток, могут вспомнить весь процесс замораживания и оттаивания клеток, закрыв глаза. Скорее всего вы представите холодильник и резервуар с жидким азотом, а также не забудете про раствор для криоконсервации. Какова же роль этого реагента для замораживания клеток, на который иногда не обращают внимания?
Окно для замораживания клеток
Ветераны клеточных экспериментов понимают, что замораживание клеток связано с медленным замораживанием и быстрым оттаиванием. Традиционный процесс заключается в ресуспендировании клеток раствором для криоконсервации и упаковке их в пробирки для криоконсервации, затем медленном охлаждении до -80℃, а затем переносе их в резервуары с жидким азотом для длительного хранения. Основная функция реагентов для криоконсервации - предотвратить образование кристаллов льда, которые могут повредить клетки во время процесса замораживания, и в то же время обеспечить поддержку клеток во время длительного процесса замораживания и оттаивания. На рынке представлено множество готовых коммерческих продуктов для криоконсервации клеток, в то время как некоторые специалисты настаивают на использовании собственных самодельных растворов для криоконсервации. Действительно ли жидкость для криоконсервации клеток оказывает существенное влияние на их сохранность и восстановление? На самом деле, ДА - результаты сохранения клеток могут сильно отличаться в зависимости от раствора для криоконсервации.
Как приготовить собственный раствор для криоконсервации?
Если клетки, подлежащие замораживанию, относятся к широко используемой клеточной линии, многие лаборатории предпочитают готовить собственный раствор для криоконсервации. Типичные составы включают от 5 до 10 % ДМСО (диметилсульфоксида) и от 5 до 40 % сыворотки в базовой среде. Существуют даже составы, содержащие 90 % сыворотки + 10 % ДМСО.
ДМСО - это осмопротектор, который снижает точку замерзания клеток, уменьшает образование кристаллов льда и предотвращает процесс замораживания от необратимых механических повреждений клеток. Альбумин в сыворотке - ключевой компонент, образующий защитный слой вокруг клеток. Сыворотка также может связываться с токсинами, выделяющимися, когда клетки начинают оттаивать. При замораживании в среде, богатой питательными веществами, клетки также с большей вероятностью вернутся в свое изначальное состояние после оттаивания. Помимо ДМСО и сыворотки, базовая среда, обычно содержащаяся в растворе для криоконсервации, также служит для поддержания осмоляльности и дополнения некоторых питательных веществ, которые не присутствуют в достаточном количестве в сыворотке.
Сочетание этих компонентов придает самостоятельно приготовленному раствору для замораживания основные функции - защиту клеток от повреждения кристаллами льда, питательную поддержку и химическую защиту, что делает возможным длительное криосохранение клеток. Однако самодельный раствор для криоконсервации, используемый для замораживания некоторых чувствительных клеток (например, стволовых), может работать не так эффективно и стабильно. Клетки может быть трудно восстановить, и даже некоторые динамичные клеточные линии будут иметь проблемы с морфологией и скоростью пролиферации после восстановления. Связано ли это с раствором для криоконсервации?
Каковы потенциальные риски использования самостоятельно приготовленных растворов для криоконсервации?
Самостоятельно приготовленные культуральные растворы почти всегда содержат сыворотку и ДМСО. Сыворотка, которая, как мы знаем, является естественным соединением из компонентов животного животных, имеет вариации от партии к партии, которых невозможно полностью избежать. Жизнеспособность клеток после размораживания может варьироваться в зависимости от партии сыворотки в криоконсерванте. Первичные клетки более чувствительны и, следовательно, более подвержены этому, чем иммортализованные клеточные линии. В случае плюрипотентных стволовых клеток (ПСК) некоторые компоненты сыворотки могут вызвать их дифференцировку, но не в том направлении, в котором вы ожидаете. ДМСО, хотя и защищает клетки в определенных условиях, по своей природе токсичен, а также изменяет проницаемость биопленок для электролитов и метаболитов. Кроме того, некоторые хрупкие клетки сложнее восстановить в прежнее состояние из-за присутствия ДМСО.
В итоге, несмотря на то, что самодельные криоконсерванты относительно недороги, все больше и больше экспертов области предпочитают использовать надежные коммерческие растворы для замораживания клеток из-за потребности в надежности и стабильности процесса, а также для снижения риска потери ценных клеток.
Существует ли надежный коммерческий вариант криоконсерванта?
Чтобы помочь большему числу пользователей решить проблемы, возникающие в процессе замораживания и хранения клеток, компания ExCell Bio выпустила серию готовых к использованию растворов для замораживания и хранения клеток с определенным химическим составом и с тщательной проверкой результатов применения.
1.CD OptiVitro Protein-Free,CD Cell Freeze
Cat#UC000-N011,UC000-N021
Готовый к использованию раствор для криоконсервации широкого спектра клеток млекопитающих без риска экзогенного загрязнения.
2. Классический раствор для криоконсервации клеток OptiVitro без сыворотки
Cat#VUC00-N011
Подходит для различных видов криоконсервации клеток млекопитающих, готовый к использованию раствор для криоконсервации, более универсальный.
3. Без ДМСО, OptiVitro DMSO-Free Cell Freeze
Cat#UC000-N031
Готовый к использованию раствор для криоконсервации адгезивных клеток, включая широкий спектр стволовых клеток.
Информация о продукте
"Надев защиту для рук и лица, мы открыли резервуар с жидким азотом, и белый туман, образовавшийся в результате испарения жидкого азота, медленно потек вниз из отверстия резервуара. Заглянув в резервуар, мы, кажется, почувствовали, как поверхность жидкого азота соприкасается с воздухом, кипящим под воздействием огромной разницы температур. Бесчисленные клетки, словно семена жизни, спят внутри криогенной жидкости, недоступной глазу. Мы как можно быстрее достаем уже промаркированные пробирки для криоконсервации клеток. После быстрого оттаивания на водяной бане и ряда операций клетки завершают переход из спящего состояния в активное, после чего нам остается только молиться, чтобы пробудившиеся клетки как можно скорее вернулись к своей нормальной жизнедеятельности".
Большинство из тех, кто сталкивался с культивированием клеток, могут вспомнить весь процесс замораживания и оттаивания клеток, закрыв глаза. Скорее всего вы представите холодильник и резервуар с жидким азотом, а также не забудете про раствор для криоконсервации. Какова же роль этого реагента для замораживания клеток, на который иногда не обращают внимания?
Окно для замораживания клеток
Ветераны клеточных экспериментов понимают, что замораживание клеток связано с медленным замораживанием и быстрым оттаиванием. Традиционный процесс заключается в ресуспендировании клеток раствором для криоконсервации и упаковке их в пробирки для криоконсервации, затем медленном охлаждении до -80℃, а затем переносе их в резервуары с жидким азотом для длительного хранения. Основная функция реагентов для криоконсервации - предотвратить образование кристаллов льда, которые могут повредить клетки во время процесса замораживания, и в то же время обеспечить поддержку клеток во время длительного процесса замораживания и оттаивания. На рынке представлено множество готовых коммерческих продуктов для криоконсервации клеток, в то время как некоторые специалисты настаивают на использовании собственных самодельных растворов для криоконсервации. Действительно ли жидкость для криоконсервации клеток оказывает существенное влияние на их сохранность и восстановление? На самом деле, ДА - результаты сохранения клеток могут сильно отличаться в зависимости от раствора для криоконсервации.
Как приготовить собственный раствор для криоконсервации?
Если клетки, подлежащие замораживанию, относятся к широко используемой клеточной линии, многие лаборатории предпочитают готовить собственный раствор для криоконсервации. Типичные составы включают от 5 до 10 % ДМСО (диметилсульфоксида) и от 5 до 40 % сыворотки в базовой среде. Существуют даже составы, содержащие 90 % сыворотки + 10 % ДМСО.
ДМСО - это осмопротектор, который снижает точку замерзания клеток, уменьшает образование кристаллов льда и предотвращает процесс замораживания от необратимых механических повреждений клеток. Альбумин в сыворотке - ключевой компонент, образующий защитный слой вокруг клеток. Сыворотка также может связываться с токсинами, выделяющимися, когда клетки начинают оттаивать. При замораживании в среде, богатой питательными веществами, клетки также с большей вероятностью вернутся в свое изначальное состояние после оттаивания. Помимо ДМСО и сыворотки, базовая среда, обычно содержащаяся в растворе для криоконсервации, также служит для поддержания осмоляльности и дополнения некоторых питательных веществ, которые не присутствуют в достаточном количестве в сыворотке.
Сочетание этих компонентов придает самостоятельно приготовленному раствору для замораживания основные функции - защиту клеток от повреждения кристаллами льда, питательную поддержку и химическую защиту, что делает возможным длительное криосохранение клеток. Однако самодельный раствор для криоконсервации, используемый для замораживания некоторых чувствительных клеток (например, стволовых), может работать не так эффективно и стабильно. Клетки может быть трудно восстановить, и даже некоторые динамичные клеточные линии будут иметь проблемы с морфологией и скоростью пролиферации после восстановления. Связано ли это с раствором для криоконсервации?
Каковы потенциальные риски использования самостоятельно приготовленных растворов для криоконсервации?
Самостоятельно приготовленные культуральные растворы почти всегда содержат сыворотку и ДМСО. Сыворотка, которая, как мы знаем, является естественным соединением из компонентов животного животных, имеет вариации от партии к партии, которых невозможно полностью избежать. Жизнеспособность клеток после размораживания может варьироваться в зависимости от партии сыворотки в криоконсерванте. Первичные клетки более чувствительны и, следовательно, более подвержены этому, чем иммортализованные клеточные линии. В случае плюрипотентных стволовых клеток (ПСК) некоторые компоненты сыворотки могут вызвать их дифференцировку, но не в том направлении, в котором вы ожидаете. ДМСО, хотя и защищает клетки в определенных условиях, по своей природе токсичен, а также изменяет проницаемость биопленок для электролитов и метаболитов. Кроме того, некоторые хрупкие клетки сложнее восстановить в прежнее состояние из-за присутствия ДМСО.
В итоге, несмотря на то, что самодельные криоконсерванты относительно недороги, все больше и больше экспертов области предпочитают использовать надежные коммерческие растворы для замораживания клеток из-за потребности в надежности и стабильности процесса, а также для снижения риска потери ценных клеток.
Существует ли надежный коммерческий вариант криоконсерванта?
Чтобы помочь большему числу пользователей решить проблемы, возникающие в процессе замораживания и хранения клеток, компания ExCell Bio выпустила серию готовых к использованию растворов для замораживания и хранения клеток с определенным химическим составом и с тщательной проверкой результатов применения.
1.CD OptiVitro Protein-Free,CD Cell Freeze
Cat#UC000-N011,UC000-N021
Готовый к использованию раствор для криоконсервации широкого спектра клеток млекопитающих без риска экзогенного загрязнения.
2. Классический раствор для криоконсервации клеток OptiVitro без сыворотки
Cat#VUC00-N011
Подходит для различных видов криоконсервации клеток млекопитающих, готовый к использованию раствор для криоконсервации, более универсальный.
3. Без ДМСО, OptiVitro DMSO-Free Cell Freeze
Cat#UC000-N031
Готовый к использованию раствор для криоконсервации адгезивных клеток, включая широкий спектр стволовых клеток.
Информация о продукте
